MV & Exosomes分离流程

流程总览(此流程以细胞培养液 CCM来源为例)

1.前处理:去除细胞、死细胞、细胞碎屑

2.MV收集:方法A(10000 xg差速离心)或方法B(TFF-MV切向流过滤)

3. exosome 纯化:过 0.22 μm滤膜 →TFF-EVs 浓缩/洗涤回收

操作步骤

1. 前处理(Removal of cells / dead cells / debris)

1. 离心 300 xg，10 min，4℃，取上清。

2. 离心 2,000 xg，10-20min，4℃，取上清。

可视情况再离心5,000-8,000 xg，10min以降低后续堵膜风险。

II. 收集MV(microvesicles / large EVs)

方法 3A:差速离心

3A-1. 离心 10,000 xg，30 min，4℃，沉淀为MV pellet，以1~2 mL PBS 轻柔回溶。

Ps.若追求较高纯度，可再以10,000 xg，10 min，4℃洗一次。

方法 3B:切向流过滤 (建议用于中大体积，放大量最友善)

3B-1.将「步骤2 上清」上TFF-MV(150nm)，并收集过滤液(filtrate) 供后续

exosome 纯化使用。

3B-2.CCM 完全过滤后，以1~2倍体积的PBS冲洗装置1~2次，弃洗涤液。3B-3.关闭过滤端，以定量PBS(如2mL)重覆冲洗卡匣后回收MV(自滞留端)。

IIl.纯化 exosome ( small EVs )

4.取 3A-1上清液或3B-1过滤液，经0.22μm无菌滤膜过滤，去残留大颗粒。

5.取步骤 4过滤液上TFF-EVs(50 nm)，以1~2倍体积PBS 冲洗数次，弃洗涤液。

6.关闭过滤端，以定量PBS(如2mL)重覆冲洗卡匣后回收exosomes(自滞留端)。